關于免疫組化的封閉：用和二抗來源一致的血清在保濕盒中于37℃孵育15~30min，然后甩去封閉用血清，勿洗；注意：封閉時間根據(jù)具體實驗調整；封閉液一般選用5%BSA或與二抗來源一致的血清，切記是BSA，不是PBS.很多論壇寫的是PBS,太坑了。①使用血清好還是BSA好？答：***是待檢樣本會非特異性的和蛋白結合，從而導致背景過高，因此可以用BSA或血清封閉掉這部分非特異性的結合，從這點看，BSA和血清沒有明顯區(qū)別。第二是待檢樣本中可能會有Fc受體，可以和抗體恒定區(qū)結合，與抗體特異性無關，封閉血清中有抗體，因此用血清可以封閉掉一抗及二抗和樣本Fc受體之間結合。BSA則無法封閉Fc受體。做好免疫組化，你需要了解這些！河南切片免疫組化推薦

**和預后有關的免疫組化。與**及預后有關的標記物主要分以下為三類:(1)cancer基因標記物:如cancer基因C-erbB2、c-myc、P53蛋白等，卵巢上皮性cancer中P53的過表達與cancer的擴散、分化、術后殘存cancer灶呈正相關;乳腺cancer中表達C-erbB2的浸潤性cancer患者預后差;肺cancer中突變型P53基因蛋白表達增高，PTEN基因表達減弱，提示cancer預后不良。(2)細胞增殖性標記物:cancer細胞增生是否活躍直接影響著臨床的**與預后，如表皮生長因子受體(EGFR)、Ki-67、PCNA、cycling等可對cancer細胞的增生做出評價，表達指數(shù)越高，表明其增殖指數(shù)越活躍，惡性度增高，預后不良，其中以惡性淋巴瘤乳腺cancer較為明顯;在對乳腺cancer的研究中發(fā)現(xiàn)Ki-67、EGFR陽性者，淋巴結轉移率高，并與ji素受體的表達呈負相關。(3)類固醇ji素受體:如雌ji素受體(ER)、孕ji素受體(PR)等，應用更為范圍廣的的是子宮內膜cancer及乳腺cancer，如對乳腺cancer中ER、PR的檢測，有助于決定臨床**中是否需要加入內分泌ji素阻斷**，并能判斷預后，ER及PR陽性表達、原cancer基因(C-erbB-2)陰性表達病例對三苯氧胺等ji素**反應良好，而ERPR、C-erbB-2三種抗體均陰性(TNBC)患者采用三苯氧胺可能意義不大。動物組織免疫組化怎么選擇臨床樣本檢測，免疫組化，英瀚斯生物專業(yè)病理。

細胞屬性的判定，免疫組化也可以進行這方面的臨床應用。通過特定抗體標記出細胞內相應的抗原成分，來判定細胞的屬性，確定cancer的來源。如細胞角蛋白(CK)是上皮性標記，CK陽性提示cancer為上皮源性cancer;降鈣素抗體是甲狀腺髓樣cancer特有的標記;甲狀腺球蛋白(Tg)陽性提示是甲狀腺濾泡性cancer;前列腺特異性抗原(PSA)只見于前列腺上皮;膠質纖維酸性蛋白(GFAP)陽性則提示膠質cancer;CD20和CD79a陽性則提示B細胞淋巴瘤;平滑肌肌動蛋白(Actin)陽性提示cancer為平滑肌源性;胃腸道間質瘤中原cancer基因蛋白產(chǎn)物CD117陽性;血管源性cancer中內皮細胞標記物CD34陽性等等。如果您需要做實驗外包，可以與我們英瀚斯生物進行聯(lián)系。

免疫組化中免疫膠體金技術，英瀚斯生物小編為您說明介紹。免疫膠體金技術是以膠體金這樣一種特殊的金屬顆粒作為標記物。膠體金是指金的水溶膠，它能迅速而穩(wěn)定地吸附蛋白，對蛋白的生物學活性則沒有明顯的影響。因此，用膠體金標記一抗、二抗或其他能特異性結合免疫球蛋白的分子(如葡萄球菌A蛋白)等作為探針，就能對組織或細胞內的抗原進行定性、定位，甚至定量研究。由于膠體金有不同大小的顆粒，且膠體金的電子密度高，所以免疫膠體金技術特別適合于免疫電鏡的單標記或多標記定位研究。由于膠體金本身呈淡至深紅色，因此也適合進行光鏡觀察。如應用銀加強的免疫金銀法則更便于光鏡觀察。免疫組化結果怎么看？

免疫組化實驗流程介紹：

英瀚斯生物為您整理總結免疫組化詳細步驟：

1、SP三步法

1）石蠟切片，常規(guī)脫蠟至水。

2）0.3%或3%H2O2去離子水（無色液體）孵育10-30分鐘，以滅活內源性過氧化物酶活性。

3）蒸餾水沖洗，PBS浸泡5分鐘

4）候選步驟：采用抗原修復：微波（建議30分鐘內4次中火）、高壓、酶修復方法。自然冷卻，再用3分鐘×3次.

5）血清封閉：室溫15-30分鐘，盡可能與二抗來源一致。傾去，勿洗。

6）滴加適當比例稀釋的一抗，37℃孵育2~3小時或4℃過夜（比較好復溫）。PBS沖洗，3分鐘×5次。

7）滴加生物素標記的二抗，室溫或37℃孵育30分鐘-1h。

8）PBS沖洗，3分鐘×5次。

9）滴加SP（鏈霉親和素-過氧化物酶），室溫或37℃孵育30分鐘-1h。

10）PBS沖洗，3分鐘×5次。

11）顯色劑顯色（DAB等）。

12）自來水充分沖洗。

13）可進行復染，脫水，透明。

14）選擇適當?shù)姆馄瑒┓馄?動物、細胞的免疫組化、免疫熒光，就找英瀚斯生物！動物組織免疫組化怎么選擇

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目前幾種常用免疫組化方法簡單介紹

1）免疫熒光方法是**早建立的免疫組織化學技術。由于免疫熒光技術特異性強、靈敏度高、快速簡便，所以在臨床病理診斷、檢驗中應用較廣。它利用抗原抗體特異性結合的原理，先將已知抗體標上熒光素，以此作為探針檢查細胞或組織內的相應抗原，在熒光顯微鏡下觀察。當抗原抗體復合物中的熒光素受激發(fā)光的照射后即會發(fā)出一定波長的熒光，從而可確定組織中某種抗原的定位，進而還可進行定量分析。

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2）免疫酶標方法免疫酶標方法是繼免疫熒光后，于60年代發(fā)展起來的技術?；驹硎窍纫悦笜擞浀目贵w與組織或細胞作用，然后加入酶的底物，生成有色的不溶性產(chǎn)物或具有一定電子密度的顆粒，通過光鏡或電鏡，對細胞表面和細胞內的各種抗原成分進行定位研究。免疫酶標技術是目前**常用的技術。本方法與免疫熒光技術相比的主要優(yōu)點是：定位準確，對比度好，染色標本可長期保存，適合于光、電鏡研究等。免疫酶標方法的發(fā)展非常迅速，已經(jīng)衍生出了多種標記方法，且隨著方法的不斷改進和創(chuàng)新，其特異性和靈敏度都在不斷提高，使用也越來越方便。目前在病理診斷中廣為使用的有ABC法、SP三步法、即用型二步法檢測系統(tǒng)等。

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